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產(chǎn)品名稱:

細(xì)菌DNA/RNA提取試劑盒

產(chǎn)品型號(hào): 產(chǎn)品時(shí)間: 2023-07-05
細(xì)菌DNA/RNA提取試劑盒可以從多種樣本中提取基因組DNA,包括動(dòng)物內(nèi)臟、肌肉組織、血液以及培養(yǎng)的細(xì)胞和細(xì)菌等。本法基于對(duì)基因組DNA具有高度選擇性的高分子膜材料,只需幾個(gè)步驟即可完成提取過(guò)程,在30分鐘內(nèi)完成高純度DNA的提取。

本試劑盒提取的DNA可以用于Real-time PCR、測(cè)序等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品概述

【產(chǎn)品名稱】

通用名    細(xì)菌DNA/RNA提取試劑盒(吸附柱法)

Name      DNA Extraction KitAdsorption column method

 

【產(chǎn)品介紹】

本試劑盒可以從多種樣本中提取基因組DNA,包括動(dòng)物內(nèi)臟、肌肉組織、血液以及培養(yǎng)的細(xì)胞和細(xì)菌等。本法基于對(duì)基因組DNA具有高度選擇性的高分子膜材料,只需幾個(gè)步驟即可完成提取過(guò)程,在30分鐘內(nèi)完成高純度DNA的提取。

本試劑盒提取的DNA可以用于Real-time PCR、測(cè)序等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

 

【產(chǎn)品原理】

動(dòng)物內(nèi)臟、肌肉組織、血液以及培養(yǎng)的細(xì)胞和細(xì)菌等樣本在裂解液和蛋白酶K的作用下破碎并可使大部分蛋白質(zhì)變性,釋放出基因組DNA。在其所提供的合適的鹽離子和pH環(huán)境的作用下,與乙醇混合后,基因組DNA特異性地結(jié)合于膜上,大部分蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)在兩次洗滌過(guò)程中被洗下,而DNA與膜結(jié)合牢固,在洗脫液的作用下被洗下。

 

【試劑組成】

 

規(guī)格

蛋白酶K

0.5mL

裂解液

10.0mL

去蛋白漂洗液

11.825mL(使用前加入15.675mL無(wú)水乙醇)

洗滌液

11.55mL(使用前加入26.95mL無(wú)水乙醇)

洗脫液

10.0mL

吸附柱

50

使用說(shuō)明書(shū)

1

 

【試劑規(guī)格】50 T/盒。

【儲(chǔ)存運(yùn)輸】蛋白酶K保存于2~8。其余成分可室溫儲(chǔ)存。保存得當(dāng)可穩(wěn)定使用18個(gè)月。

自備材料

滅菌的1.5mL離心管、各種規(guī)格滅菌的槍頭、離心機(jī)(大轉(zhuǎn)速不小于14,000rpm)、無(wú)水乙醇、漩渦震蕩器等。

 

細(xì)菌DNA/RNA提取試劑盒操作步驟

蛋白酶K放于2~8冰箱保存,使用時(shí)取出。

  1. 樣本處理

1全血:

a)如果全血體積大于200μL,請(qǐng)先使用紅細(xì)胞裂解液或淋巴細(xì)胞分離液收集細(xì)胞,然后用200μL PBS緩沖液或生理鹽水充分重懸,進(jìn)行步驟2

b)如果樣本不足200μL,可以加入適量的PBS緩沖液或者生理鹽水補(bǔ)足200μL,進(jìn)行步驟2。

       c)從人血液中提取DNA的方法與從哺乳動(dòng)物血液中提取DNA的方法相同。

d)從鳥(niǎo)類血液中提取的DNA需將不多于20μL血液樣本,加PBS緩沖液至200μL,混合后開(kāi)始提取,進(jìn)行步驟2。

2)組織樣本:

每份組織分別從不同的三個(gè)位置稱取1g,用手術(shù)剪剪碎混勻后取約50mg置于研磨器中,加入0.5mL-1mL生理鹽水研磨,勻漿后轉(zhuǎn)入1.5mL滅菌的離心管,8000rpm離心2分鐘,取上清200μL加入1.5mL離心管,進(jìn)行步驟2。

3)培養(yǎng)的細(xì)胞:

       懸浮細(xì)胞:細(xì)胞培養(yǎng)液3000rpm離心2分鐘,去上清,收集2×106個(gè)細(xì)胞(容積200μL),轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管,進(jìn)行步驟2。

       貼壁細(xì)胞:去上清,收集2×106個(gè)細(xì)胞(容積200μL),轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管,進(jìn)行步驟2。

4)其他液體樣本:

1000rpm離心2分鐘 ,棄上清,收集沉淀,進(jìn)行步驟2

5)菌液:

       培養(yǎng)的菌液,5000rpm離心1分鐘,棄上清,收集至少2×106個(gè)細(xì)菌,進(jìn)行步驟2。

  1. 200μL上述樣本和10μL 蛋白酶K加入一只新的1.5mL離心管,然后加入200μL 裂解液,震蕩混勻5-10秒。
  2. 56溫育10分鐘。
  3. 在上述離心管中加入200μL無(wú)水乙醇,充分震蕩混勻5-10(此步驟不可離心)。
  4. 將步驟4混勻的液體吸取至一只套有收集管的吸附柱上(注意不要吸到懸浮的雜質(zhì),以免阻塞吸附膜),6000-8000rpm離心1分鐘,棄去管內(nèi)液體。
  5. 500μL去蛋白漂洗液加入吸附柱中,10000rpm離心30-60秒,棄去管內(nèi)液體。
  6. 700μL 洗滌液加入吸附柱中,10000rpm離心30-60秒,棄去管內(nèi)液體。
  7. 將吸附柱放回接液管上,13000rpm離心2分鐘。
  8. 將吸附柱轉(zhuǎn)移到一只干凈的1.5mL離心管(不提供)中。
  9. 向吸附柱內(nèi)加50-100μL 洗脫液,室溫靜置1分鐘,13000rpm離心1分鐘,棄吸附柱,離心管中液體含有基因組DNA。提純的DNA如果不立刻使用,請(qǐng)保存于-20。

 

注意事項(xiàng)

1. 本試劑盒適用于不多于200μL的全血基因組提取,大于200μL的血液建議用紅細(xì)胞裂解液或淋巴細(xì)胞分離液處理后將白細(xì)胞富集,然后進(jìn)行后續(xù)操作。

2. 適用于從動(dòng)物內(nèi)臟、肌肉組織、血液,以及培養(yǎng)的細(xì)胞和細(xì)菌等樣本提取DNA。

3. 新鮮血液存放于2-8中或者-20保存。

4. 提取的DNA含量少或者基本沒(méi)有的原因:

  1)樣本中細(xì)胞過(guò)少;2)蛋白酶K沒(méi)有保存在2-8,活性降低。

5.提取鳥(niǎo)類血液時(shí),將樣本、蛋白酶K和裂解液混合后液體非常粘稠,需減少樣本使用量,20μL鳥(niǎo)類血液加入PBS緩沖液稀釋至200μL。

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