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產(chǎn)品名稱:

艱難梭菌(TCD-B)熒光探針PCR核酸檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào): 產(chǎn)品時(shí)間: 2023-03-08
艱難梭菌(TCD-B)熒光探針PCR核酸檢測(cè)試劑盒采用 TaqMan 探針法實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),設(shè)計(jì)一對(duì)艱難梭菌特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對(duì)艱難梭菌的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè), 用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。在反應(yīng)體系中含基因組模板的情況下,反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過程中相應(yīng)通道的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出,實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性、定量分析。

產(chǎn)品概述

艱難梭菌(TCD-B)熒光探針PCR核酸檢測(cè)試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:艱難梭菌(TCD-B)核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒(PCR 熒光探針法)

Name :Clostridium difficile (TCD-B) nucleic acid amplification detection kit (PCR fluorescence probe method)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)水樣糞便等樣本中的艱難梭菌,用于艱難梭菌感染的輔助診斷,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針法實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù),設(shè)計(jì)一對(duì)艱難梭菌特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR 技術(shù)對(duì)艱難梭菌的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè), 用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

0301轉(zhuǎn)基因植物NPTII基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0291轉(zhuǎn)基因植物PAT基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0281轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE601核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0271轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0251轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1(BT63)基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0241轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

說明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒(離心

柱提取法),請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對(duì)照+1 管陽性對(duì)照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)

管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;

熒光通道選擇: 檢測(cè)通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)

NONE,請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光。

5. 結(jié)果分析判定

【注意事項(xiàng)】

1)所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

2)試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*混勻并短暫離心;

3)反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

4)反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5)使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服;

6)樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

7)實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;

8)試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全 通則》進(jìn)行處理。

5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體

傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop

值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰

性對(duì)照),重新分析結(jié)果。

5.2 結(jié)果判斷

陽性:檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線。

可疑:檢測(cè)通道 Ct 值>35.0,且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn),重復(fù)試驗(yàn)

結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴(kuò)增曲線者為陽性,否則為陰性。

陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴(kuò)增曲線。

6. 檢測(cè)方法的局限性

1)樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

2)樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

3)陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

4)病原體在流行過程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

5)不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

6)試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;

7)本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且 Ct 值≤32; 以

上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率為100%。

低檢測(cè)限:1.0×10 3copies/mL。

精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測(cè) Ct 值的變異系數(shù)(CV)均小于等于 3%。

艱難梭菌(TCD-B)熒光探針PCR核酸檢測(cè)試劑盒?相關(guān)產(chǎn)品:

1011植物內(nèi)源基因tRNA-Leu核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
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0331轉(zhuǎn)基因植物Cry3A基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0321轉(zhuǎn)基因植物Cry1A(c)基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
0311轉(zhuǎn)基因植物Bar基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

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